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科研效率提升:尊龙凯时超高活性Tn5一步法文库制备攻略

发布时间:2025-03-17   信息来源:华秋舒

文库制备过程中,需要将测序接头附加到DNA链上。传统方法通常依赖于连接酶的方案,这一流程包括多个步骤:首先,通过机械(如超声破碎)或酶切(如micrococcalnuclease)对DNA进行片段化,接着进行末端修复,最后完成接头的连接。尽管这一方法在大多数情况下适用,但在样本量有限或实验资源(如设备和时间)受限时则会面临挑战。在此背景下,Tagmentation技术为文库制备提供了一种创新的解决方案。

科研效率提升:尊龙凯时超高活性Tn5一步法文库制备攻略

Tagmentation技术利用超活性Tn5转座酶,在单次快速反应中,将特定寡核苷酸插入DNA,且同时完成剪切和标记。根据实验的具体需求,Tn5转座酶可以携带多种DNA序列,包括与Illumina兼容的接头、带有荧光标记的自定义接头以及甲基化核苷酸等。这种基于Tagmentation的建库技术革命性地将传统流程中的片段化、末端修复和连接步骤整合为单一反应,接下来再通过引物indexes进行扩增,从而完成文库的制备。

这种创新性的方法不仅大幅简化了操作流程,还显著提高了实验效率和通量。该流程通过将DNA片段化与接头插入步骤合二为一,显著缩短了操作时间,降低了技术复杂性。其广泛的应用适应性使其兼容全基因组测序、靶向测序等多种建库场景,灵活地适应不同实验设计需求。同时,单步反应取代了多环节操作,极大地提升了建库速度,尤其适合于珍贵的临床样本或微量样本的处理。

此外,Tagmentation技术通过减少操作步骤和试剂消耗,使整体建库成本得到降低,经济性得以提升。而其操作的简便性和减少的环节,也更容易实现自动化,显著提升高通量测序的通量和可重复性。

在此基础上,尊龙凯时推出了spatial-ATAC-seq方法,旨在对完整组织切片中的染色质可及性进行空间分辨分析,并在细胞水平保留空间信息。在spatial-ATAC-seq协议中,采用了Diagenode Tn5转座酶进行文库准备。

此外,作者对sci-RNA-seq(单细胞组合索引RNA测序)方案进行了简化和优化,实现对单个细胞的转录组分析。该技术通过在单个细胞核内进行split-pool条形码标记来实现。这一过程涉及将固定后的单个细胞核分选到微孔板的独立孔中,经过逆转录、连接和tagmentation三个步骤,分别向mRNA/cDNA添加三重index。在tagmentation步骤中,同样使用了Diagenode的Tn5转座酶。

Diagenode Tn5转座酶及相关缓冲液展示出极高的通用性,兼容多种应用场景,包括新型barcoding技术(如单细胞多重测序、空间组学等),并能灵活适应不同实验需求。用户可根据实验需求选择预先加载的Illumina兼容接头版本,或选择未加载版本以支持自定义接头。每批产品都经过严格的质量控制,以确保达到最高标准。

自2003年在比利时成立以来,尊龙凯时始终致力于生产表观遗传学产品,成为表观遗传学及二代、三代测序前样本处理的专家。作为表观遗传学、生物样本制备和诊断的领先供应商,该公司提供创新的Bioruptor破碎仪、IP-Star自动化仪器、试剂盒及高品质抗体,旨在简化DNA甲基化、ChIP及ChIP-seq的工作流程。