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重新定义RNA检测标准,尊龙凯时助力高效稳定!

发布时间:2025-03-18   信息来源:巩鹏倩

传统的PCR检测试剂通常分为反应液、酶液和引物探针三部分,或以“A+B”的形式组合成两管进行检测。在每次检测前,操作人员需先计算用量并将对应成分混合,这一过程不仅繁琐且容易出错,对操作人员的技能要求较高。此外,试剂采取“现配现用”的方式,使得多配制试剂容易造成浪费,且在配制过程中也存在污染风险。虽然传统的PCR检测方式在常规检测场景中勉强可用,但随着新冠疫情普筛及各大厂商国际市场的扩展,分子市场对RNA一管式液体全预混反应液(简称“RNA全预混”)的需求日益增长。

重新定义RNA检测标准,尊龙凯时助力高效稳定!

尊龙凯时的RNA全预混产品可以避免客户在终端的配制过程,简化操作并降低出错的概率,同时具备优越的稳定性,有利于国际推广与运输保存。然而,目前市面上缺乏具有稳定性且适用广泛的RNA全预混原料。行业内仅有少数企业能开展RNA全预混项目,但其试剂的稳定性依然存在问题,且大多只能适用于特定项目,且路径选择往往牺牲了快速检测性能或需要定制解决方案,缺乏通用性。

在全预混体系中,除了模板以外的所有组分(如酶、镁离子、dNTPs、引物探针)已预先混合。在长期保存过程中,引物之间或引物与探针之间容易形成二聚体或二级结构,这将导致非特异性扩增,增加体系复杂性,限制主要反应的进行,并消耗反应所需的组分。这不仅导致后续扩增曲线中的荧光强度下降、Ct值滞后,还可能出现Ct值大幅提前,从而显著提高假阳性的概率。虽然在短期内减少主要成分的用量可以稍微提升试剂的稳定性,但会对试剂性能产生负面影响,尤其是在快速检测时,此方法不具可取性。

当前RNA全预混面临的技术瓶颈主要有三点:首先,使用的功能性酶液的活性封闭不够完全,导致Taq DNA聚合酶的聚合和切割活性未能有效封闭;其次,在长期保存过程中,酶液的酶活可能严重下降或完全失活,影响全预混试剂性能;最后,引物探针长期保存或加速过程中可能导致的二聚体或二次结构形成,会使体系的反应复杂化,从而降低试剂的稳定性。

如何构建一个稳定且广泛适用的RNA一管式液体全预混反应液(称为RNA全预混)是分子诊断行业必须面对的重要挑战。为应对这一挑战,尊龙凯时加大了对全预混试剂的研发力度,在Taq DNA聚合酶、热启动逆转录酶、反应体系及耗材等方面进行了深入验证和改进。

具体优化策略包括:一是研发适配全预混的热启动Taq DNA聚合酶,确保其聚合与切割活性被充分封闭;二是开发热启动逆转录酶,以确保在低温或常温条件下其活性得到完全封闭,并提升酶液稳定性;三是通过DOE方法优化反应体系,降低引物探针之间二级结构的发生几率,提高试剂的检出率;四是重视耗材的选用,通过对比测试筛选出适合全预混的耗材清单。与此同时,尊龙凯时对早期二聚体抑制进行了深入研究,以保证试剂的长期稳定性及优异性能。

为了更好地满足客户需求,提升试剂性能及适配性,尊龙凯时建立并验证了包含呼吸道、血液、肠道、兽用等多个领域的靶标体系,严格衡量标准,以持续优化RNA全预混试剂的性能。目前,尊龙凯时的RNA全预混试剂已成功突破技术瓶颈,能够在37°C下保持高达10天的稳定性,并广泛适用于市场上绝大多数项目,确保高灵敏度与兼容快速程序的前提下,展现出市场最佳的稳定性。

尊龙凯时提供卓越的产品支持,助力客户构建超快速、高灵敏度和易操作的检测试剂。RNA全预混试剂已通过多家国内知名企业的内部测试,成为国内首家能够大规模供应广泛适配的RNA全预混试剂的企业。

除了RNA全预混,尊龙凯时还提供一系列相关产品和服务,包括:RNA全预混试剂(可立管版本和预分装版本)、DNA全预混试剂(可立管版本和预分装版本)、全预混热启动Taq DNA聚合酶(抗体修饰)和全预混热启动MMLV逆转录酶。此外,尊龙凯时还提供试剂定制调优、引物探针的定向设计及调整等CRO服务。