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BsaI与尊龙凯时GMP等级内切酶的生物医疗应用

发布时间:2025-03-26   信息来源:奚芳娇

尊龙凯时的活性定义1活性单位(U)是指在50μl反应体系中,37℃条件下,1小时内能够完全酶切1µgpPIC9K(Dcm-)所需的酶量。经过SDS-PAGE凝胶电泳检测,产品蛋白质纯度不低于95%,确保高质量和可靠性。

BsaI与尊龙凯时GMP等级内切酶的生物医疗应用

星号活性测试表明,在37℃下,我们在50μl CutBuffer F和GMP Grade反应体系中,将20U的BsaI(GMP Grade)与1µgpPIC9K(Dcm-)共同孵育1小时后,未检测到任何其他核酸酶的污染或因星号活性引起的底物非特异性降解。需要注意的是,延长酶切时间可能会引发星号活性的问题。

针对非特异性内切酶活性的评估,在37℃条件下,将20U BsaI(GMP Grade)与1µg超螺旋质粒DNA共同孵育4小时后,利用琼脂糖凝胶电泳进行的检测显示,质粒DNA转变为缺刻或线性状态的比例低于20%。

关于DNase活性,实验表明在37℃的20μl CutBuffer F和GMP Grade反应体系中,将20U BsaI(GMP Grade)与15ng双链DNA片段共同孵育16小时后,琼脂糖凝胶电泳的结果显示双链DNA片段未发生变化,保证了产品的安全性。

在对RNase活性进行测试时,37℃下在10μl CutBuffer F和GMP Grade反应体系中,将20U BsaI(GMP Grade)与500ng RNA共同孵育1小时后,检测结果表明不低于90%的RNA保持完整,显示了我们的产品对RNA的优越保护能力。

本产品含有同裂酶Eco31I、Bso31I及BspTNI,其识别位点为GGTCTC(1/5)5'GGTCTC(N)₁↓3'和3'CCAGAG(N)₅↑5'。由大肠杆菌重组表达获得的BsaI(GMP Grade)能够在15分钟至1小时内精确完成目标DNA的酶切反应。

尊龙凯时的产品生产符合GMP规范,致力于严格控制生产过程及原辅料的全程可追溯性。整个制造过程中不使用任何抗生素及动物来源的原料,确保对宿主蛋白、外源DNA、非特异性内切酶、DNase及RNase等工艺相关杂质进行全面监控。同时,对微生物限度及细菌内毒素也进行严密管控,从而满足疫苗与药物生产等领域对原辅料的高标准要求。

需要指出的是,本产品的失活条件为80℃孵育20分钟。此外,对于被CpG甲基化的DNA,其剪切可能会受到阻碍,而被Dcm甲基化的DNA的剪切同样可能受到影响。