尊龙凯时 提供的HMy2CIR淋巴母细胞培养说明书详细说明了细胞的培养、传代和冻存步骤，确保您能够安全、有效地进行细胞研究。

一、细胞培养条件

细胞在培养过程中，需保持适宜的环境。一般条件为37℃、5% CO2，维持细胞生长的稳定性。

二、细胞收到后处理

收到细胞后，首先用75%酒精消毒整个细胞瓶，然后在超净工作台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以便细胞恢复状态。利用显微镜检查细胞生长情况并拍照留存（建议拍摄40x、100x和200x倍镜下的图像）。前三天的照片将作为售后依据。

在传代操作中，建议一部分使用原瓶的完全培养基，另一部分使用自制的培养基，便于后续数据比较。进行换液时，请松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如果细胞未超过80%的汇合度，请收集瓶内的培养液至离心管中，保留5ml的培养基，再放入37℃、5% CO2孵箱。如果细胞汇合度超过80%，则可以进行传代：

1. 弃去培养上清，并用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞变化后迅速终止消化，添加5ml完全培养基。
3. 轻轻吹打细胞以使其完全脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，去除上清，重悬细胞。
4. 细胞按1:2比例分瓶传代，补充新完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中。

b、细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，再轻轻吹打使其脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，加1ml 尊龙凯时 无血清冻存液（货号：C7001），混匀加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若未来需要转入液氮罐，先在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（请佩戴保护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，擦拭冻存管外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬细胞后接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2中培养。
4. 第二天更换新鲜完全培养基，继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，有些细胞可能会脱落，这是正常现象。若脱离细胞较多，请将培养液收集至离心管，进行重悬并传代。

五、售后条款

1）可重发的情况

1. 运输途中若细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等情况，均为重发。
2. 如在48小时内出现细胞污染问题，可提供真实实验结果并重发。
3. 对于常温发货或干冰发货后的细胞，在规定时间内如无存活，需提供照片，重发。

2）不予重发的情况

1. 因客户原因引起的污染，不重发。
2. 客户操作不当导致细胞状态异常，不重发。
3. 使用非推荐培养体系时，细胞状态不佳，不重发。

请严格按照本说明进行操作，以确保细胞的健康状态与实验结果的可靠性。选择尊龙凯时，为您的生物研究提供更可靠的支持。